1、培养细胞如何提取mRNA，如何逆转录？
细胞总RNA的提取
1）、6孔板细胞（CNE-2）汇合度为90-100%时，取出无菌室，去其上清，用PBS洗两次后，每孔加TRIZOL试剂（Gibco公司）
ml，摇匀，无菌罩内消化3-5分钟（观察：液体变粘稠，细胞脱壁）。
2）、将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5
EP管中，加新开的氯仿0.2
ml，轻摇15秒。
3）、室温静置2-3分钟后，12000
min，4℃，离心。然后取上清无色水相（约0.6
ml）到
EP管（DEPC处理过），加0.5
ml新开的异丙醇，室温下静置10分钟。
rpm，10分钟，4℃，离心。观察总RNA在管底的白色沉淀，弃去上清（小心别丢了沉淀），75%乙醇1.0
ml洗涤（用DEPC水新配制）后，7500
min，4℃离心。
5）、去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10分钟，
DEPC处理水20-30
ul加入，中枪打匀，55-60℃水浴10分钟溶解总RNA，测OD值。
6）、电泳。
从总RNA中分离mRNA（Oligotex
1）、取上述提取的总RNA若干（少于0.25
mg）到一个新的无RNase
的EP管中，用无RNase的水定容到250
2）、加入Buffer
ul。用Tip打匀或用手弹匀。
3）、70℃水浴，3分钟（裂解RNA的二级结构）。
4）、20-30℃条件下，静置10分钟（让Oligotex与mRNA结合）。
5）、高速离心2分钟，小心吸走上清（该上清要保留），留下约50
ul的上清在原管里。
6）、用Buffer
ul重悬含Oligotex/mRNA复合物的沉淀，然后将这些加到套有1.5
EP管的SPIN柱子上，高速离心1分钟。
7）、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加Buffer
ul到柱子，高速离心1分钟，丢掉滤过液。
8）、将SPIN柱子移到一个新的EP管上，加20-100
ul热的（70℃）Buffer
OEB到柱子上，用Tip来回吸打3-4次，高速离心1分钟。
9）、为保证最大的
mRNA产量，可再次重复第8步。
10）、电泳。
RNA提取的原理就是核酸在异丙醇中的溶解度很低！其他步骤都是防止RNA降解和使RNA从细胞中溶出。
逆转录过程请看。
2、奶牛有公的么
答案是肯定的，没有公母之分怎么下牛犊？产奶的是母奶牛，公奶牛是用来交配的。
当然，如果把奶牛界定为一个经济学的概念，即一个品种的概念，不是生物学的概念，那么奶牛肯定有公母之分。如果把奶牛界定为能产牛奶的牛，那它就没有公母之分－－看问题的角度不同，决定人们做事的不同方式。
习惯上，按养殖的目的把牛分成奶牛、肉牛，常见的奶牛有荷斯坦奶牛(即黑白花奶牛)、爱尔夏牛、娟姗牛等。母奶牛也要产犊后才产奶的。不过现在很多奶牛场一般是采用人工受精的方式，减少公牛饲养量。
奶牛的公母的比例大约是8：100。刚生下来得小牛如果是母的就养着，如果是公的按照10：1的比例养活，剩下的9/10杀掉。因为公奶牛犊太“贱”了，有人靠育肥“公奶牛”（一般是当作肉牛养的）也赚了不少。
为了保证所有的母奶牛都在哺乳期，所以奶牛们要不停的交配。
相关：奶牛公犊的利用
随着人们生活水平的提高和保健意识的增强，人们对牛奶的需求激增。这种背景形势逼迫我国的奶牛业正以前所未有的速度发展，奶牛存栏已达450万头。按农业部和欧盟的专家对奶量分析的数字来折算，到2030年，我国奶牛存栏将达1500万头以上。如果这些奶牛都能正常产犊，每年将有同样数量的犊牛出生，其中50％是公犊，可达750万头，这笔巨大的资源按照农户传统的方法是无法利用的。农户方式的利用范围随着经济的发展和科学技术水平的提高变得越来越小；育肥肉用，被大量优秀肉牛品种所排挤；训养役用，被各种农机所取代。奶牛业为公犊找到新的出路，使得这一巨大资源更高效益的利用就是值得研究和注意的问题了。
过去，我国奶牛业的公犊除个别训养役用或育肥肉用外，大量的没有利用而废弃。70年代以后才有人开始开发利用公犊资源。西方奶牛业发达国家注意利用公犊资源较早，而且同时伴有大量的科技投入。著名的英国OXOID公司，就是一个利用公犊从奶牛场发展起来的生物制剂公司，美国的DIFCO、GIBCO、HYCLONE和SIGMA等公司都有闻名于世的公犊生物产品。这些公犊生物制剂的开发和生产，为企业增加了经济效益，也提高了企业的知名度。
公犊独具的生理特征决定了其皮、毛、血、肉、骨和脏器是可贵的动物资源，也是其它动物无法取代的，这就决定了开发公犊资源的经济价值和社会效益。
皮公犊皮革其强度、柔韧、透气和保暖性是其它皮革无法比拟的，不仅可做一般衣料，而且制做航空服尤佳，传称公犊的一张皮价值半头牛，可见犊牛皮价值是很高的。其被毛是制取氨基酸的原料。
血犊牛血清是生物制品长盛不衰的原材料。由于血清的成分极其复杂，对离体动物细胞的功能作用还没有搞清，所以犊牛血清始终不能完全被人工合成的物质所取代。至今犊牛血清仍旧是组织、细胞培养不可替代的原材料。由于生产犊牛血清本微利厚，所以不少个体散户纷纷作坊式简易生产，产品质量差，生产规模小，其产品不能满足用户尤其是生物医药用户的需要，其实这也是犊牛资源在另外程度上的浪费。我国准备加入WTO严格执行GMP，以与国际的药品生产接轨，对血清的质量要求越来越高，因此国外著名品牌血清纷纷抢摊中国市场。然而进口的血清不仅价格昂贵，而且并未使用户完全满意，市场需要更加符合要求的血清。我国奶牛业的发展将使公犊越来越多，资源更加丰富，我们应该适时合理利用资源，以达到增加经济效益和社会效益的目的。
肉犊牛肉，我们是利用得最完全的，全部食用。其实还有另外的用途，犊牛肉是蛋白质，可以有控制的水解为胨、肽，而成为培养基的原材料。我国微生物学和医药卫生界曾呼吁为保证检验工作的质量，应保持培养基原材料稳定的质量，生产培养基原材料应有稳定的原料来源。公犊资源的不断丰富恰恰满足了这个条件。
脏器公犊的不少脏器是生物药品的原料，如脑、肺、心、肝、胃等都可以提取出不少有用的生物制剂。有的脏器还是提取某些药剂的唯一原料，如胸腺、小肠、眼等。公犊的用途十分广泛，公犊资源也是现代生物技术不可多得的可利用资源，应该得到人们重视，首先应该得到奶牛业同仁的重视，尤其养殖奶牛的密集地区，奶牛业发展很快，公犊急剧增加，全部废弃十分可惜。充分利用公犊资源，做为另外一项新兴产业经营起来，即可增加收入，又避免了浪费。
3、gibco和赛默飞的关系
gibco是赛默飞旗下的细胞培养基。赛默飞世尔科技公司是全球科学服务领域的领导者，致力于帮助客户使世界更健康，更清洁，在培养细胞开始将gibco作为其培养基。
